免疫細胞無血清培養基

簡要描述:
友康生物免疫細胞無血清培養基(CIK),用于單核細胞向CIK細胞的體外誘導及體外大規模擴增培養。

產品描述

免疫細胞無血清培養基(CIK)

【免疫細胞無血清培養基(CIK)   用途與描述 】

免疫細胞無血清培養基,可培養新鮮采集的外周血樣本,也可培養濃縮白細胞樣本以及凍存的單個核細胞。
可用于臍帶血樣本的培養。

【免疫細胞無血清培養基(CIK)    規格與保存 】


產品名稱


產品貨號


數量與規格


CIK培養套裝(外周血+2L體系)


NC0101 + AN0101.2


1000mL*2+2L試劑盒


CIK培養套裝(外周血+3L體系)


NC0101 + AN0101.3


1000mL*3+3L試劑盒


CIK培養套裝(臍帶血+2L體系)


NC0101 + AN0104.2


1000mL*2+2L試劑盒


CIK培養套裝(臍帶血+3L體系)


NC0101 + AN0104.3


1000mL*3+3L試劑盒

2L培養體系免疫細胞無血清培養基套裝:適用于50mL外周血的樣本量,使用2L培養基。

產品名稱

描述

規格

保存條件

保存期限

免疫細胞無血清培養基(CIK)

免疫細胞體外培養

1000mL/瓶*2

2-8℃保存

12個月

CIK細胞誘導因子試劑盒

YC001起始培養時添加

1支

-20℃保存

YC002接種24h后添加

1支

YC003接種24h后添加

1支

YC004接種24h后添加

1支

YC005添加至培養基中使用,1支/L

2支

3L培養體系免疫細胞無血清培養基套裝:適用于100mL外周血的樣本量,使用3L培養基。

產品名稱

描述

規格

保存條件

保存期限

免疫細胞無血清培養基(CIK)

免疫細胞體外培養

1000mL/瓶*3

2-8℃保存

12個月

CIK細胞誘導因子試劑盒

YC001起始培養時添加

1支

-20℃保存

YC002接種24h后添加

1支

YC003接種24h后添加

1支

YC004接種24h后添加

1支

YC005添加至培養基中使用,1支/L

3支

【免疫細胞無血清培養基(CIK)  使用方法】

1、采集與分離外周血
采集外周血,Ficoll密度梯度離心分離收集單個核細胞。

2、單個核細胞的接種與誘導活化
1) 0d時,繃胞計數。按細胞密度2x106cell/mL接種至對應體積的培養液中。
    添加誘導因子YC001一支。添加10%比例的自體血漿。
2) 1d時(24小時),添加誘導因子YC002、YC003、YC004至已經接種細胞的培養液中。
    將YC005添加至未經使用的培養基中,待用。

3、細胞的連續培養與擴增
1) 3d時,補入新鮮培養液,調整細胞密度至(0.6-0.8)x106cell/mL。同時添加新加入培養液體積l10%比例的自體血漿。補液比例大致
    在1:2左右(原有培養液體積:新加培養液體積)
2) 5d時,補入新鮮培養液,調整細胞密度至(0.6-0.8)x106cell/mL。補液比例大致在1:3左右。
3) 7d時,補入新鮮培養液,調整細胞密度至(06-08)x106cell/mL。補液比例大致在1:2左右。
4) 9d時,將剩余培養液全部加入。

4、收獲細胞
培養周期結束后,依據細胞量收獲細胞。

【供參考的補液程序范圍】

2L培養體系補液體積示意表:50mL外周血,接種密度2.0x106 cell/mL。

天數

操作方式

原有培養液
體積/mL

新加培養液
體積/mL

培養液
總體積/mL

血漿添加
/mL

因子添加

備注

0d

接種

0

25

25

2.5

YC001

T75瓶

1d

誘導





YC002
YC003/YC004


3d

補液

25

50

75

5


換瓶
T175瓶

5d

補液

75

225

300



轉培養袋,
平分兩袋

7d

補液

300

700

1000



每袋補350mL

9d

補液

1000

1000

2000



每袋補500mL

備注:
1)補液后推薦密度區間為(0.6-0.8)x106cell/mL。若按體積補液與推薦密度區間有沖突的話,請以推薦密度區間為準。
2)純粹按固定體積接種與補液并非不可,但應建立在豐富的樣本量基礎之上。
3)外周血量少于50mL,應使用的補液程序,請聯系本公司免費索取。 

3L培養體系補液體積示意表:100mL外周血,接種密度2.0x106 cell/mL。

天數

操作方式

原有培養液
體積/mL

新加培養液
體積/mL

培養液
總體積/mL

血漿添加
/mL

因子添加

備注

0d

接種

0

50

50

5

YC001

T175瓶

1d

誘導





YC002
YC003/YC004


3d

補液

50

100

150

10



5d

補液

150

450

600



轉培養袋,
平分兩袋

7d

補液

600

1400

2000



每袋補700mL

9d

補液

2000

1000

3000



每袋補500mL

備注:
1)補液后推薦密度區間為(0.6-0.8)x106cell/mL。若按體積補液與推薦密度區問有沖突的話,請以推薦密度區間為準。
2)純粹按固定體積接種與補液并非不可,但應建立在豐富的樣本量基礎之上。
3)外周血量少于100mL,應使用的補液程序,請聯系本公司免費索取。

【免疫細胞無血清培養基(CIK)   產品性能之外周血樣本

1. 細胞總數:125億,折合62.5億/L。

免疫細胞無血清培養基培養的細胞的數量增長曲線.jpg

2、CD3+CD56+陽性率在25%-55%

免疫細胞無血清培養基培養的細胞的流式檢測數據.jpg

3. 細胞支持密度更高。
培養14天后,細胞密度可至5.7×106cell/mL。 培養15天后,細胞密度可至6.2×106cell/mL。

免疫細胞無血清培養基培養的細胞的密度.jpg

4. 培養后期補液結束后,細胞維持能力更強。
最后一次補液(9d),持續至17天,細胞數量一直維持增長,未見明顯下降。

免疫細胞無血清培養基培養的細胞的維持能力.jpg

【免疫細胞無血清培養基(CIK)   產品性能之臍帶血樣本

50mL臍帶血

免疫細胞無血清培養基補液程序-臍帶血.jpg

細胞生長曲線

CIK細胞生長曲線—臍帶血.jpg

CIK細胞陽性率

CIK CD3.jpg     CIK  CD56.jpg     CIK  CD3+CD56+.jpg

客戶問答

1、你們推薦的接種密度為2.0,1.0密度接種不可以嗎?

答:2.0的接種密度,為特別優化的接種密度。此接種密度下,能夠更好的發揮出此培養基的特點,即前期生長速度快,后期維持能力強,能夠支持高密度細胞生長。細胞更“好養”。
2.0的接種密度較1.0的接種密度,也可將誘導因子的使用量降低50%,從而降低了用戶的使用成本。
1.0密度接種也是可以的,只是前期細胞生長速度較2.0接種緩慢。按密度補液的規則同樣適用。
需要特別說明的是,不是所有培養基均可支持高密度接種與高密度培養的。一般認為,只有營養更豐富的無血清細胞培養基可以支持高密度接種,而低血清培養基只能支持低密度接種。

2、我現在已有現成的培養程序,非得按照你們的程序去做嗎?

答:更改培養程序從來不是一個簡單的事情,但確實不存在一個適用所有品牌培養基的培養程序。
至于是否需要更換或調整培養程序,視情況而定:
a)如果您現在使用的是Lonz*、Gibc*等無血清培養基,您可完全套用現有的培養程序。
b)如果您現在使用的是55*產品,您現有的培養程序可能不適用。
有一個簡單的方法去判斷您現有的程序是否可以不加調整的應用到本產品上,如果您現在每次補液后的密度區間在0.5-1.0之間,那您的程序不需做調整,可以直接使用。
友康免疫無血清細胞培養基(CIK)在40-50mL外周血,14d-15d培養周期,2L培養基使用量。能獲得的細胞數范圍在80億-120億之間。如果您現有的程序難以到達此區間。建議嘗試我們建議的培養程序。

3、如果用一句話來概括你們的培養程序,是什么?

答:2.0、早轉袋、9d。
2.0:是指接種密度2.0
早轉袋:是指如果有可能,盡早的將細胞轉至培養袋中培養。培養袋中的氧氣的含量要遠遠高于培養瓶中。能夠更好的發揮該培養基支持高密度培養的特性。
我公司大量的實驗數據表明,相同情況下,培養袋中的細胞數量比培養瓶中的多30%左右。
9d:是指9d (9x24小時)時,將全部的培養液全部加入,一直至14d,甚至18d均不需補液。
由于該培養液具有出色的后期維持能力,通過減少1次補液,不僅減少了操作,也降低了污染的風險。

4、你們程序最后一次補液是9d,我最遲18d才會使用細胞,不會發生細胞數量下降情況嗎?

答:不會。我們公司大量的實驗數據能夠支撐:最后一次補液后,延至10日后,期間細胞數量不會顯著下降。

使用說明

暫無使用說明下載

背景知識

2016年3月1日,免疫細胞無血清培養基-2016版產品正式上市。

與2015版產品相比,免疫細胞無血清培養基-2016版產品在產品容錯性、程序適應能力、細胞維持能力、最大支持密度等4個方面均有了顯著的提升。

根據友康生物的產品研發規則,已經上市的產品,在市場銷售時間段內,均需進行持續更新。產品更新的依據主要在于客戶反饋回來的使用信息與我方研發人員在產品測試新發現的問題。一般說來,上市3年以內的產品,每年(12個月)進行一次產品更新。3年以后的產品,每24月進行一次更新。改進完成的免疫細胞(CIK細胞)無血清培養基產品,已與2016年3月1日上市銷售。取代了原有的2015版產品。

2016款產品,相比2015款產品,在如下4個方面有了顯著性提升:
第一, 產品容錯性。
CIK細胞無血清培養基產品,其用途現在主要是生產用途。與實驗室使用不同,生產環境下使用有著截然不同的特點:比如,按時間間隔補液不管由于樣本原因導致的細胞密度的差異;比如,由于跨周末導致的超長時間的補液間隔(72小時);比如,樣本量大導致的樣本與血漿處理難以整齊劃一等。這些問題,以往只能靠提供使用人的操作步驟來解決。更新后的產品,主要是調整了產品的容錯性,做到了在上述狀況下,也可得到一個大致滿意的結果。簡化了操作步驟,降低了對人員技能的要求。

第二, 程序適應能力
坦率的說,不同的CIK細胞無血清培養基,有其匹配的培養程序,包括接種密度、因子添加種類與數量、補液數量與間隔等。但由于生產培訓與生產SOP原因,去更改原有操作SOP總是很困難的。改進后的2016版產品當然也有匹配的培養程序,但同時也做到了在其他培養程序下也能得到一個大致滿意的結果。

第三, 細胞維持能力
一般由于成本等方面的考慮,在培養的后期12d以后,一般就很少再添加培養基了。因此,保證在不添加培養液的96小時內,細胞數不下降就很重要的。改進后的2016版產品滿足了這個要求。

第四, 最大支持密度
CIK細胞體外大規模擴增,有著“兩高”的要求,更高的細胞數、更高的陽性率。改進后的2016版產品在靜態培養情況下,最高支持密度可達到7.0×106cell/ml。

 

單頁下載

畫冊下載地址